免疫組化除正常的真實(shí)的陽(yáng)性信號(hào)外常常會(huì)遇到不正常的背景著色,這些非正常的著色稱為“雜音”染色?!半s音”染色種類繁多,產(chǎn)生的原因也多種多樣,為了便于說(shuō)明,遠(yuǎn)慕將其歸納為下面幾種。
膠體金法是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下,可聚合成一定大小的金顆粒,并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài),形成帶負(fù)電的疏水膠溶液,由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài),故稱膠體金。
注意實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化問(wèn)題,注意污染的存在,同時(shí)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上的操作應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題。發(fā)現(xiàn)DNA污染,用DNAse I消化1小時(shí),37度離心取上清的時(shí)候,一定要小心不要取到中間的膜和下面的液體。
HEPES是一種非離子緩沖液,在pH 7.2~7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力,在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34 g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10~25 mmol/L。
斜面培養(yǎng)基(agarslantculture-medium):固體培養(yǎng)基(solid culture medium)的一種形式;制作時(shí)應(yīng)趁熱定量分裝于試管內(nèi),并凝固成斜面的稱為斜面培養(yǎng)基,用于菌種擴(kuò)大轉(zhuǎn)管及菌種保藏。
傳統(tǒng)生物堿的分離方法主要有:浸漬、煎煮、溶劑回流、滲漉等,以及新開(kāi)發(fā)的超臨界流體萃取技術(shù),微波輔助提取技術(shù),超聲輔助提取技術(shù),雙水相萃取技術(shù)等。
良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提。由于免疫組化染色過(guò)程中存在很多步驟或環(huán)節(jié),每一個(gè)步驟或環(huán)節(jié)都可能影響到染色的最終結(jié)果,因此,要做好一張高質(zhì)量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。
病毒純化需要獲得極高的純度水平,以確保病毒質(zhì)量和感染性,而對(duì)于蛋白質(zhì)純化,可以根據(jù)其具體應(yīng)用來(lái)標(biāo)準(zhǔn)純度水平。因此,在提取和純化病毒時(shí),要求其完全純凈,而在純化蛋白質(zhì)時(shí),這種要求可以更靈活。
一般是通過(guò)生化方法吧蛋白提取出來(lái),蛋白質(zhì)帶有電荷么,是將混合樣品中的蛋白質(zhì),其原理是第一向基于蛋白質(zhì)PI不同用等電聚焦,電泳時(shí)的正極與負(fù)極都會(huì)發(fā)生電解反應(yīng),向著與其電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象稱為電泳。